基于HPLC-UVD-ELSD對(duì)酸棗仁中斯皮諾素及酸棗仁皂苷A的含量測(cè)定

更新時(shí)間：2025-10-20

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前言

酸棗仁為鼠李科植物酸棗的干燥成熟種子，其核心功效為養(yǎng)心補(bǔ)肝、寧心安神、斂汗生津，臨床常用于治療心肝血虛所致的心悸失眠、虛煩多夢(mèng)、自汗盜汗及津傷口渴等癥；常與茯苓、知母等配伍增強(qiáng)安神之效，或與人參、黃芪合用改善氣虛汗出?，F(xiàn)代研究表明，酸棗仁在調(diào)理神經(jīng)衰弱、更年期綜合征等方面有一定的應(yīng)用價(jià)值。

斯皮諾素是從酸棗仁中提取的黃酮碳苷類化合物，在部分鼠李科植物中也有分布，其獨(dú)特結(jié)構(gòu)賦予良好水溶性與生物活性，具有鎮(zhèn)靜安神、抗氧化、抗炎等功效，可改善睡眠，保護(hù)心腦系統(tǒng)；目前廣泛應(yīng)用于中藥制劑、功能性食品及保健品領(lǐng)域。

酸棗仁皂苷A是從酸棗仁中提取的五環(huán)三萜皂苷類成分，結(jié)構(gòu)復(fù)雜且具有特異性；具備顯著的鎮(zhèn)靜催眠、抗焦慮作用，還能調(diào)節(jié)血脂、保護(hù)心肌。憑借這些藥理活性，酸棗仁皂苷A成為中藥安神方劑的關(guān)鍵物質(zhì)，也在心血管疾病防治相關(guān)的醫(yī)藥研發(fā)與功能性產(chǎn)品開(kāi)發(fā)中備受關(guān)注。

原理

酸棗仁試樣經(jīng)浸泡、加熱回流后，采用梯度洗脫條件，使用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器串聯(lián)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，斯皮諾素檢測(cè)波長(zhǎng)為335 nm，酸棗仁皂苷A采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，分別用外標(biāo)法與外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)方程計(jì)算酸棗仁中斯皮諾素和酸棗仁皂苷A的含量。

色譜條件

悟空K2025高效液相色譜儀：K2025P2二元高壓輸液泵、K2025AS自動(dòng)進(jìn)樣器、K2025CO柱溫箱、K2025UVD 紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器、K2025ELSD 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、Wookinglab色譜工作站；

基于HPLC-UVD-ELSD對(duì)酸棗仁中斯皮諾素及酸棗仁皂苷A的含量測(cè)定

色譜柱：C₁₈，4.6×250 mm，5 µm或者相當(dāng)?shù)纳V柱；

流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫：

時(shí)間（min）	流速 (mL/min)	A (%)	B (%)
0.0	1.0	10.0	90.0
10.0	1.0	19.0	81.0
20.0	1.0	23.0	77.0
30.0	1.0	40.0	60.0
37.0	1.0	40.0	60.0
43.0	1.0	100.0	0.0

注：為了系統(tǒng)在進(jìn)樣前達(dá)到平衡，每次進(jìn)樣前運(yùn)行10min。

進(jìn)樣量：酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液5 μL、15 μL，供試品溶液及斯皮諾素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液10 μL；

洗針液：90 %甲醇水溶液；

柱溫：25℃；

檢測(cè)器及參數(shù)：紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為335 nm；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，蒸發(fā)溫度為80℃，氣體流量為3.0 L/min。

使用紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器對(duì)斯皮諾素測(cè)定

重復(fù)性測(cè)試

按照色譜條件進(jìn)行采集，將斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為50 μg/mL）進(jìn)樣10 μL，色譜圖如圖1所示，積分結(jié)果如表1所示。

圖1 斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

表1 斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖積分結(jié)果

目標(biāo)物	斯皮諾素
保留時(shí)間（min）	20.542
峰面積（mAU.s）	300.770
峰高(mAU)	20.383
理論塔板數(shù)	48818
對(duì)稱/拖尾因子	1.21

由表1中數(shù)據(jù)可知，斯皮諾素峰的理論塔板數(shù)為48818，拖尾因子為1.21，具有良好的峰形。

將斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7針，疊加的色譜圖如圖2所示，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖2 斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7針疊加的色譜圖

表2 斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7針重復(fù)性數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

目標(biāo)物	斯皮諾素
目標(biāo)物	保留時(shí)間（min）	峰面積（mAU.s）
1	20.542	294.896
2	20.558	292.525
3	20.542	293.943
4	20.575	292.193
5	20.542	292.328
6	20.525	292.234
7	20.517	292.581
平均值	20.543	292.814
RSD%	0.09	0.40

由表2中數(shù)據(jù)可知，斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7針，保留時(shí)間的RSD為0.09 %，峰面積的RSD為0.40 %，具有良好的定性定量重復(fù)性。

含量測(cè)定

按照色譜條件，將斯皮諾素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液上機(jī)測(cè)定，斯皮諾素在5.0 μg/mL~200.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，確定系數(shù)R²＞0.999。斯皮諾素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液疊加的色譜圖如圖3所示。

圖3 斯皮諾素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液疊加的色譜圖

使用蒸發(fā)光檢測(cè)器對(duì)酸棗仁皂苷A的測(cè)定

酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液色譜圖

按照色譜條件進(jìn)行采集，將酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液進(jìn)樣15 μL，色譜圖如圖4所示，積分結(jié)果如表3所示。

圖4 酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液的色譜圖

表3 酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液色譜圖積分結(jié)果

目標(biāo)物	酸棗仁皂苷A
保留時(shí)間（min）	33.956
峰面積（mAU.s）	42.225
峰高(mAU)	5.776
理論塔板數(shù)	503314
對(duì)稱/拖尾因子	1.08

由表3中數(shù)據(jù)可知，酸棗仁皂苷A峰的理論塔板數(shù)為503314，拖尾因子為1.08，具有良好的峰形。

含量測(cè)定

外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)方程

精密吸取酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液5 μL、15 μL與供試品溶液10 μL，依次注入液相色譜儀中測(cè)定。不同進(jìn)樣量酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液的色譜圖如圖5所示。

圖5 不同進(jìn)樣量酸棗仁皂苷A對(duì)照品溶液的色譜圖

結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以乙腈和水為流動(dòng)相，使用梯度洗脫條件，將紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器串聯(lián)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，對(duì)斯皮諾素和酸棗仁皂苷A的理論塔板數(shù)、重復(fù)性以及酸棗仁中斯皮諾素和酸棗仁皂苷A的含量進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：

斯皮諾素測(cè)定項(xiàng)目中，斯皮諾素峰的理論塔板數(shù)為48818，拖尾因子為1.21，具有良好的峰形；斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣7針，保留時(shí)間的RSD為0.09 %，峰面積的RSD為0.40 %，具有良好的定性定量重復(fù)性；斯皮諾素在5.0 μg/mL~200.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，確定系數(shù)R²＞0.999。

酸棗仁皂苷A測(cè)定項(xiàng)目中，酸棗仁皂苷A峰的理論塔板數(shù)為503314，拖尾因子為1.08，具有良好的峰形。

因此，悟空 K2025高效液相色譜儀配置紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器串聯(lián)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，可同時(shí)對(duì)酸棗仁中斯皮諾素和酸棗仁皂苷A的含量進(jìn)行測(cè)定。

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